Produkto apžvalga
CELLIPOWER06 yra krepšelinio tipo bioreaktorius, specialiai sukurtas pritvirtintųjų ląstelių kultūroms auginti naudojant plokščiuosius nešiklius (pluoštiniai diskai). Išlaikydamos ląsteles pluoštinio disko nešikliuose, ši sistema maksimaliai sumažina šlyties įtampą ir burbulų sukeliamą žalą. Ji tinka gyvūnų ir vabzdžių pritvirtintųjų ląstelių kultūroms, ypač didelėms virusinių vakcinų, rekombinantų baltymų ir virusinių vektorių gamybos apimtims. Ši sistema sėkmingai taikyta 400 L pramoninio masto Vero, MDCK ir CHO ląstelių kultūroms.
Pagrindinė techninė pranašumai
Plokščiojojo nešiklio fiksuotojo lovo projektavimas
Naudoja šešiakampių ląstelių struktūros aukštos tankio augimo matricas (pvz., Fibra-Cel® diskus arba DISKS nešiklius), kurios užtikrina itin didelį specifinį paviršiaus plotą (apytiksliai 1200 cm²/g). Tai leidžia ląstelėms augti monosluoksniais nešiklio struktūroje, žymiai padidinant ląstelių tankį ir kultūros efektyvumą.
Sumažinta skersinė įtempis
Krepšinės tipo fiksuotosios lovos konstrukcija nešiklius patikimai pritvirtina bioreaktoriuje, visiškai išvengiant ląstelių sąlyčio su maišytuvu. Skersinė įtempis sumažinama iki minimumo, o ląstelių gyvybingumas viršija 95 %. Ypač tinkama skersinei įtempiui jautrioms ląstelėms, tokioms kaip Vero, MDCK ir CHO.
Didelis ląstelių tankis ir stabilumas
Ląstelės tvirtai prisitvirtina prie nešiklio matricos ir mažiau linkusios atsiskleisti, todėl galima ilgalaikė stabili kultūra (>7 dienų). Tai žymiai padidina produkto išeigą ir sumažina šeimininko ląstelių DNR kiekį nuėmimo metu.
Pramoninio masto patvirtinimas
Sėkmingai naudojama 400 l vakcinos ir rekombinantų baltymų gamyboje, įskaitant Vero ląstelių šunų užkrėtimo vakciną, CHO ląstelių EPO gamybą ir MDCK ląstelių paukščių gripo vakciną.
Modulinis inžinerinis projektavimas
Palaiko internetinę CIP/SIP valymo ir sterilizavimo sistemą, pasirinktinę automatinę nešiklio įkrovos/iškrovos sistemą bei sterilizavimo šaltojo taško stebėseną, kad būtų laikomasi GMP reikalavimų.
Nuotolinio stebėjimo galimybė
Visiškai integruota su SCADA sistemomis realaus laiko duomenų registravimui ir nuotoliniam valdymui, užtikrinant procesų vientisumą keliuose serijų cikluose ir gamybos vietose.
Virusinės vakcinos gamyba
Vero ląstelės: Šunų užkrėtimo vakcina, inaktyvuota poliomielito vakcina (IPV), kiaulių epideminio viduriavimo vakcina, kraujavimo karštinės su inkstų sindromu vakcina, klasikinės kiaulių ligos vakcina
MDCK ląstelės: Paukščių gripo vakcina
BSR ląstelės: Veterinarijos šunų užkrėtimo vakcina
Diploidinės ląstelės: Žmogaus šunų užkrėtimo vakcina (diploidinės kilmės)
Rekombinantinė baltymų ekspresija
CHO ląstelės: eritropoetinas (EPO)
Vero ląstelės: kiti rekombinantiniai baltymai
Tolydus perfuzijos auginimas
Palaiko tolydų perfuzijos auginimą iki 35 dienų su stabilia ląstelių koncentracija ir žemomis likutinėmis šeimininko ląstelių DNR koncentracijomis.
Mastelio padidinimas ir gamyba
Tinka viso mastelio patvirtinimui nuo laboratorinio iki pramoninės gamybos, įskaitant bandymų mastelio pavyzdžių paruošimą ir didelio mastelio komercinę gamybą.
Techninės specifikacijos
DIRBAMAS TURIS
20–400 L
Nešiotojo tipo
Poliesteriniai pluoštiniai diskų nešikliai (prieinami skirtingų porų dydžių ir storio)
Rekomenduojamas nešiklių apkrova
30 g/L
Agitacijos valdymas
50–300 aps/min, magnetiniu būdu varomas
DO valdymas
0–100 %, ±1 % (per masės srauto reguliatorių dujų maišymu)
Temperatūros valdymas
5–65 °C, ±0,1 °C
Ištirpusį deguonį (DO)
40 %, ±2 %, palaiko O₂/N₂/oro maišymą
pH valdymas
2–12, ±0,01, aprūpintas automatinio šarmo/CO₂ dozavimo sistema
Orinimo sistema
Gilus dujų prapūtimas, 0,3–2 tūrio vienetai per minutę
Priežiūros sistema
4 valdikliai, kiekvienas palaiko iki 6 aukštos tikslumo peristaltinių siurblių
Maksimalus ląstelių tankis
Iki 4,5 × 10⁷ ląstelių/mL
Sterilizavimo būdas
Sterilizacija vietoje (SIP)
Medžiaga
316L nerūdijančiojo plieno (atitinka JAV farmakopėjos klasės VI reikalavimus)
Sertifikatai
JAV maisto ir vaistų administracijos (FDA) 21 CFR 11 dalis, GMP
Valdymo sistema
Skirstytos architektūros sistema su daugialypiu vartotojų prieigos valdymu ir audito takelio funkcionalumu
Sėkmingų atvejų tyrimai
Vero ląstelių šunų pasiutligės vakcina
400 L mastelyje pasiekta >98 % ląstelių gyvybingumas ir virusų titras – 1,2 × 10⁶ FFU/ml.
CHO ląstelių EPO gamyba
Tolydžioje perfuzinėje veikimo režimo sąlygomis pasiektas stabilus 35 dienų trukmės gamybos ciklas su >90 % gliukozilinės sudėties nuoseklumu.
MDCK ląstelių paukščių gripo vakcina
400 L mastelyje pasiekti 5 × 10⁸ TCID₅₀/ml produkto kiekiai su likusiu šeimininko ląstelių DNR kiekiu <10 pg/ml.
Diploidinių ląstelių šunų šiltinės vakcina
Pasiektas aukštos grynumo vakcinos gamybos procesas su mažu šeimininko DNR likutiniu kiekiu, kurį palaiko plokščiosios (lapinės) nešiklių konstrukcijos.
Techninis papildymas
Plokščiosios (lapinės) nešiklių bioreaktoriaus veikimo principas (pluoštinis diskas)
Plokščiosios (lapinės) nešiklių bioreaktorius (vadinamas taip pat krepšelinio tipo bioreaktoriumi) fiksuoja ląsteles medžiagose su žiedinės struktūros, didelės tankio augimo matricomis, pvz., Fibra-Cel® diskais ar DISKS nešikliais. Tai sukuria statinį augimo aplinkos tipą, panašų į volelių (rolerių) kultūrą, vienu metu pašalinant tradicinių volelių sistemų mastelio padidinimo apribojimus.
Šie nešikliai pagaminti iš poliesterio pluošto ir polipropileno, jų vieno sluoksnio storis yra apytiksliai 0,44 mm, o porų dydis – apytiksliai 15 μm. Dėl labai didelės specifinės paviršiaus plotos (apie 1200 cm²/g) jie palaiko viensluoksninį ląstelių augimą nešiklių matricoje. Auginimo metu nešikliai fiksuojami krepšio konstrukcijoje reaktoriuje, kad būtų užkirstas kelias tiesioginiam ląstelių ir maišymo įrenginio sąlyčiui, taip mažinant šlyties įtempimą ir pasiekiant ląstelių gyvybingumą virš 95 %.
Mastelio didinimo strategija
Mastelio didinimo strategija žymiai skiriasi nuo įprastų maišomųjų rezervuarų:
Fiksuotosios lovos konstrukcinis dizainas
Nešiklių kiekis lieka pastovus, kad būtų užtikrinta vienoda ląstelių pasiskirstymas matricoje.
Žemo šlyties maišymo optimizavimas
Pramoniniame mastelyje didinant gamybą maišymo greitis pritaikomas atsižvelgiant į nešiklių tipą ir tankį, paprastai palaikomas 50–150 apsukų per minutę, kad būtų išvengta per didelio sutrikdymo.
Orinimo optimizavimas
Giliai mikropučių dujų įpurškimas naudojamas, kad būtų išvengta tiesioginio putų poveikio nešikliams ir užtikrinta vienoda ištirpusio deguonies pasiskirstymas.
Tolydus perfuzijos palaikymas
Krepšinės tipo fiksuotojo lovo konstrukcija išlaiko ląsteles ir nešiklius, leisdama stabiliai kultivuoti jas iki 35 dienų ir žymiai padidinant produkto išeigą.
Modulinis dizainas
Leidžia tiesiaeigę mastelio didinimą nuo laboratorinio iki pramoninio gamybos lygio, tuo pačiu išlaikant nuoseklų hidrodinaminį ir masės pernašos pobūdį.
Proceso privalumai
Sumažinta skersinė įtempis
Fiksuotojo lovo lakštinio nešiklio konstrukcija visiškai izoliuoja ląsteles nuo maišytuvo mentės, todėl ji ypač tinka šluostei jautrioms ląstelėms, tokioms kaip Vero, MDCK ir CHO.
Didelis ląstelių tankis ir stabilumas
Ląstelės, įsiterpusios į nešiklius, mažiau linkusios atsiskelti, todėl galima ilgalaikė stabili kultūra (>7 dienos) ir žymiai didesnės išeigos.
Šeimininko ląstelių DNR kontrolė
Nešikliais grindžiama ląstelių imobilizavimo sistema sumažina ląstelių nusėdimą ir mažina likutinę šeimininko lāstelių DNR derliaus medžiagoje, atitinkamai tenkindama PASA ir Kinijos farmakopėjos reikalavimus dėl vakcinų produktų – ≤100 pg/dozė.
Proceso lankstumas
Palaiko partijinį, pusrūšinį ir nuolatinį perfuzijos režimą, ypač tinkamą virusinių vektorių ir sekrecinių baltymų gamybai.
Pramoninė validacija
Sėkmingai patvirtinta 400 L mastelyje keliems produktams, įskaitant iš CHO ląstelių gautą eritropoetiną (EPO), iš Vero ląstelių gautą šunų dūrio vakciną ir iš MDCK ląstelių gautą paukščių gripo vakciną.
Nešiklių pirminė apdorojimo ir naudojimo procedūra
Nešiklių mirkymas
Visiškai panardinti pluoštinio diskų nešiklius į injekciniam vandeniui skirtą vandenį (WFI) arba valytą vandenį, kol jie visiškai sudrėks.
pH subalansavimas
Prausti valytu vandeniu, kol pH artėja prie valyto vandens pH.
Sterilizacija
Įdėti nešiklius į bioreaktorių, pridėti PBS tirpalą ir sterilizuoti aukštoje temperatūroje 30 minučių.
Sterilumo tyrimai
Po atvėsinimo išpilti PBS tirpalą ir užpildyti kultūros terpe 48 valandų steriliškumo tyrimui.
Ląstelių inokuliacija
Tipiška inokuliacijos tankis yra 3–5 × 10⁵ ląstelių/ml. Po inokuliacijos maždaug po 30 minučių galima pastebėti terpės išsivalymą.
Įprasta kultūra
Perėjimas prie standartinių kultūros sąlygų ląstelių dauginimui ir tikslinio produkto gamybai.
Pramoninės taikymo perspektyvos Vakcinų gamyba
Atitinka pasaulinę aukštos kokybės ir ekonomiškų vakcinų paklausą, įskaitant pasiutligės, nuo poliomielito viruso (IPV) ir paukščių gripo vakcinos.
Rekombinantinė baltymų ekspresija
Ypač tinkama brangiausiems CHO ląstelėse ekspresuojamiems rekombinantiniams baltymams, pvz., eritropoetinui (EPO).
Virusinių vektorių gamyba
Palaiko AAV, adenovirusų ir kitų virusinių vektorių masinę gamybą genų terapijos taikymams.
Ląstelių terapija
Tinka terapinėms ląstelėms, pvz., mezenchiminėms kamieninėms ląstelėms (MSC), dauginti, taip remiant regeneracinės medicinos pasiekimus.
Nuolatinė gamyba
Leidžia nuolatines perfuzijos procedūras, kurios žymiai padidina našumą ir gaminio kokybę bei sumažina gamybos kaštus.
