ไบโอรีแอคเตอร์สำหรับเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยงมีบทบาทอย่างไรในการสนับสนุนการผลิตเนื้อสัตว์จากเซลล์ในระดับอุตสาหกรรม?

ไบโอรีแอคเตอร์สำหรับเนื้อเพาะเลี้ยง: ออกแบบมาโดยเฉพาะเพื่อการเจริญเติบโตของเซลล์อย่างควบคุมได้และสามารถขยายขนาดได้

ข้อจำกัดของการหมักแบบดั้งเดิมในการเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม

การเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและการใช้ไบโอรีแอคเตอร์แบบดั้งเดิมที่ออกแบบมาสำหรับการหมักจุลินทรีย์นั้นไม่สามารถใช้ร่วมกันได้โดยพื้นฐาน เซลล์สัตว์ขาดผนังเซลล์ที่แข็งแรงซึ่งทำหน้าที่ป้องกัน และมีความเปราะบางกว่าเซลล์ยีสต์หรือแบคทีเรียมาก นอกจากนี้ เซลล์สัตว์ยังไวต่อการเปลี่ยนแปลงของสภาพแวดล้อมและจำเป็นต้องอาศัยสภาพแวดล้อมที่คงที่ ดังนั้นจึงไม่สามารถทนต่อการรบกวนอย่างรุนแรง เช่น การแตกของเยื่อหุ้มเซลล์ หรือแรงเฉือน (shear stress) ที่เกิน 0.5 พาสคาล (Pa) ได้ เซลล์สัตว์ยังต้องการระดับความอิ่มตัวของก๊าซในสื่อเพาะเลี้ยงที่เฉพาะเจาะจงและคงที่ รวมทั้งการจัดหาสารอาหารอย่างต่อเนื่องด้วย ระบบหมักแบบดั้งเดิมใช้เครื่องกวนที่สร้างแรงเฉือนสูง ซึ่งก่อให้เกิดการปั่นป่วนมากเกินไป นอกจากนี้ยังมีปัญหาการถ่ายโอนก๊าซที่ไม่ดี ส่งผลให้เมแทบอลิท เช่น แลคเตตและแอมโมเนีย สะสมอยู่ในสื่อ จนนำไปสู่การตายของเซลล์อย่างรวดเร็วและเสื่อมสภาพของเนื้อเยื่อ ความไม่สอดคล้องกันระหว่างการออกแบบเชิงวิศวกรรมกับระบบที่มีพื้นฐานทางชีวภาพนี้ สะท้อนให้เห็นถึงความจำเป็นในการพัฒนาไบโอรีแอคเตอร์ที่ไม่ใช่เพียงแค่ไบโอรีแอคเตอร์ทั่วไป แต่เป็นไบโอรีแอคเตอร์ที่ออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับการผลิตเนื้อเยื่อจากวิธีเพาะเลี้ยง (cultured meat) เช่น เฟอร์เมนเตอร์

ส่วนประกอบหลักที่ทำหน้าที่สำคัญ: การเพิ่มออกซิเจนให้เซลล์ การจัดหาสารอาหาร การขับของเสีย และการป้องกันเซลล์จากแรงเฉือน

ไบโอรีแอคเตอร์สำหรับเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยงมีหน้าที่หลักสี่ประการที่จำเป็นและพึ่งพาอาศัยกัน ซึ่งทำงานร่วมกันเพื่อสนับสนุนการเพาะเลี้ยงเซลล์ในความหนาแน่นสูงและมีอัตราการเผาผลาญสูงอย่างต่อเนื่องในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม

หน้าที่: การถ่ายโอนออกซิเจน
ความท้าทาย: การแพร่กระจายของออกซิเจนผ่านสื่อเพาะเลี้ยงมีประสิทธิภาพต่ำ
วิธีแก้ปัญหาเชิงวิศวกรรม: ไมโครสปาร์เกอร์ร่วมกับเซ็นเซอร์วัดปริมาณออกซิเจนที่ละลายได้แบบเรียลไทม์

หน้าที่: การจัดส่งสารอาหาร
ความท้าทาย: การเพาะเลี้ยงมีความหนาแน่นสูง ทำให้สารอาหารหมดลงอย่างรวดเร็ว
วิธีแก้ปัญหาเชิงวิศวกรรม: ระบบการไหลเวียนแบบเพอริสตัลติก

หน้าที่: การขับของเสีย
ความท้าทาย: ของเสีย เช่น แอมโมเนียและแลคเตท สะสมอยู่
วิธีการทางวิศวกรรม: การกรองแบบต่อเนื่องและการกำจัดของเสียโดยอัตโนมัติ

หน้าที่: การป้องกันแรงเฉือน
ความท้าทาย: ความสามารถในการรวมตัวของเซลล์และความเปราะบางของเซลล์ รวมถึงการเกิดการไหลแบบปั่นป่วน
วิธีการทางวิศวกรรม: เครื่องกวนที่สร้างแรงเฉือนต่ำ ปลอกหุ้ม และการออกแบบที่เอื้อต่อการไหลแบบชั้น (laminar flow)

ระบบและส่วนประกอบเหล่านี้สามารถรักษาความสามารถในการมีชีวิตของเซลล์ได้อย่างสม่ำเสมอเกินกว่า 95% และรองรับระบบเพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีความหนาแน่นของเซลล์มากกว่า 50 ล้านเซลล์/มล. ซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับผลิตภัณฑ์ที่สามารถผลิตเชิงพาณิชย์ได้จริงและมีความสามารถในการแข่งขันด้านต้นทุน

ข้อแลกเปลี่ยนด้านการขยายขนาดเชิงพาณิชย์ของประเภทไบโอเรแอคเตอร์สำหรับเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยง

ไบโอเรแอคเตอร์แบบถังกวน: มาตรฐานอุตสาหกรรม แต่มีปัญหาด้านอัตราการถ่ายโอนออกซิเจน (kLa) และการจัดการแรงเฉือน

มาตรฐานอุตสาหกรรมปัจจุบันของเทคโนโลยีชีวภาพสำหรับการแปรรูปชีวภาพในระดับใหญ่คือถังหมักแบบกวน (STBs) ซึ่งส่วนใหญ่เกิดจากความสามารถในการขยายขนาดได้ดีและความคุ้นเคยกับกระบวนการที่เกี่ยวข้อง รวมทั้งการถ่ายโอนมวลที่มีประสิทธิภาพสูงซึ่งวัดได้จากสัมประสิทธิ์การถ่ายโอนมวลเชิงปริมาตร (kLa) อย่างไรก็ตาม ประสิทธิภาพนี้ลดลงเนื่องจากการใช้ระบบกวนเชิงกลและปัญหาที่เกิดขึ้นกับเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม โดยงานวิจัยพบว่าความมีชีวิตของเซลล์ไมโอแบลาสต์จากลูกวัวอายุน้อยลดลงมากกว่า 25% เนื่องจากจุดที่มีแรงเฉือนสูงบริเวณใบพัดกวนในถังหมัก สำหรับปริมาตรการเพาะเลี้ยงเซลล์ตั้งแต่ 500 ลิตรขึ้นไป การปรับเปลี่ยนผิวหน้าของไมโครคาร์ริเออร์และการใช้ใบพัดแบบมารีนเบลดช่วยเพิ่มความมีชีวิตของเซลล์ได้ แต่พลังงานที่ต้องใช้กลับเพิ่มขึ้นแบบไม่เป็นเชิงเส้นเมื่อปริมาตรเพิ่มขึ้นในระดับใหญ่ นอกจากนี้ ทุกครั้งที่เพิ่มปริมาตรของถังหมักเป็น 10 เท่า จะต้องใช้พลังงานเพิ่มขึ้นประมาณ 22% เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหาการผสมไม่ทั่วถึงและเกรเดียนต์ของออกซิเจน สำหรับถังหมักแบบกวน (STBs) การออกแบบวิศวกรรมที่ซับซ้อนอย่างมากทำให้การประยุกต์ใช้ในเชิงเศรษฐศาสตร์ไม่สามารถทำได้จริงสำหรับการแปรรูปชีวภาพของเซลล์

ระบบการไหลเวียนและระบบเตียงคงที่: การสนับสนุนการเพาะเลี้ยงเซลล์แบบยึดติดที่มีความหนาแน่นสูงในระดับอุตสาหกรรม

บิโอรีแอคเตอร์แบบไหลเวียน (Perfusion bioreactors) ใช้ระบบเซลล์ที่ถูกตรึงไว้บนโครงร่างรองรับ (scaffolds) หรือไมโครคาร์รีเออร์ (microcarriers) โดยมีการหมุนเวียนสารอาหารสดอย่างต่อเนื่อง ซึ่งสามารถให้ความหนาแน่นของเซลล์ได้สูงกว่า 10⁸ เซลล์/มล. หรือมากกว่าระบบ fed-batch ถึงห้าเท่า และหลีกเลี่ยงข้อจำกัดจากแรงเฉือน (shear stress) ระบบเตียงคงที่ (Fixed-bed systems) ที่ใช้โครงร่างรองรับที่ปลอดภัยสำหรับการบริโภค (food-grade, edible scaffolds) ช่วยในการจัดรูปแบบเนื้อเยื่อ ขณะเดียวกันก็ลดการสะสมของของเสียจากการเผาผลาญ (metabolic waste) อย่างมีประสิทธิภาพ อย่างไรก็ตาม ความท้าทายด้านการขยายขนาด (scale-up) ก็สร้างข้อจำกัดเฉพาะดังนี้:

การใช้สารละลายเพาะเลี้ยง (media) เพิ่มขึ้น 30–40% เมื่อเปรียบเทียบกับบิโอรีแอคเตอร์แบบ fed-batch ซึ่งส่งผลให้ต้นทุนการดำเนินงานสูงขึ้น

ความซับซ้อนที่เพิ่มขึ้นในการทำให้ปราศจากเชื้อ (sterilization) ส่งผลให้เวลาหยุดทำงาน (downtime) ยาวนานขึ้น และเพิ่มภาระในการตรวจสอบและยืนยันประสิทธิภาพ (validation)

ในเตียงที่มีความสูงเกิน 40 ซม. จะเกิดเกรเดียนต์แบบรัศมี (radial gradients) ซึ่งส่งเสริมการเจริญเติบโตของเซลล์ที่ไม่สม่ำเสมอ (heterogeneous cell growth)

การเก็บเกี่ยวโครงสร้างเนื้อเยื่อ (tissue architectures) ที่ยังคงสมบูรณ์แบบยังคงเป็นความท้าทายทางเทคนิคอยู่

เทคโนโลยีการไหลเวียนผ่าน (Perfusion technology) ได้รับการรับรองจากองค์การอาหารและยาสหรัฐอเมริกา (FDA) สำหรับการผลิตเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยงเชิงพาณิชย์ อย่างไรก็ตาม การนำไปใช้จริงขึ้นอยู่กับการปรับสมดุลระหว่างต้นทุนการลงทุนเบื้องต้น (CAPEX) กับมูลค่าของผลิตภัณฑ์ ความปลอดเชื้อ และความสอดคล้องตามข้อบังคับการผลิตอาหารระดับเกรดอาหาร

การวิเคราะห์ช่องว่างในการตอบสนองระหว่างโซลูชันทางวิศวกรรมกับแบบจำลองการเจริญเติบโตของเนื้อสัตว์ในระดับใหญ่

การประเมินแบบไม่เป็นเชิงเส้นของกระบวนการผสม การถ่ายโอนออกซิเจน (kLa) และความสม่ำเสมอของอุณหภูมิในระบบเกิน 1,000 หน่วย

การเพิ่มขนาดของไบโอรีแอคเตอร์ที่ใช้ในการผลิตเนื้อเยื่อสัตว์ผ่านกระบวนการเพาะเลี้ยง (cultured meat) ให้ใหญ่กว่า 1,000 ลิตร จะเปิดเผยความท้าทายด้านวิศวกรรมที่สำคัญและไม่เป็นเชิงเส้น ประสิทธิภาพของการถ่ายโอนออกซิเจน (kLa) ลดลงอย่างไม่สมสัดส่วน—การเพิ่มขนาดไบโอรีแอคเตอร์เป็นสองเท่าในขณะที่ยังคงรักษาระดับออกซิเจนที่ละลายไว้ตามที่ต้องการ จำเป็นต้องเพิ่มพลังงานเข้าสู่ระบบเป็นสี่เท่า นอกจากนี้ เมื่อขนาดของไบโอรีแอคเตอร์เพิ่มขึ้น ความสม่ำเสมอของอุณหภูมิภายในระบบจะลดลงอย่างมาก การระบายความร้อนผ่านพื้นผิวภายนอกไม่เพียงพออีกต่อไปสำหรับไบโอรีแอคเตอร์ขนาดดังกล่าว และเกิดความแตกต่างของอุณหภูมิภายในถังมากกว่า 2 °C ในถังที่มีความจุเกิน 10,000 ลิตร ความเฉื่อยของการคนก็แย่ลงด้วย ส่งผลให้เกิด “โซนตาย” ที่สารอาหารขาดแคลน ซึ่งค่า pH และความเข้มข้นของเมแทบอลิทเปลี่ยนแปลงจนเข้าสู่ช่วงที่เป็นพิษต่อเซลล์ ปัญหานี้อาจทำให้ต้นทุนการดำเนินงานของโรงงานเฉพาะแห่งเพิ่มขึ้นเกือบ 740,000 ดอลลาร์สหรัฐต่อปี (Cultivarian 2025) ข้อจำกัดที่ยืนยันแล้ว ได้แก่

การถ่ายโอนออกซิเจน: การฉีดอากาศ (sparging) มีประสิทธิภาพลดลง 40–60% ในไบโอรีแอคเตอร์ที่มีขนาดใหญ่กว่า 5,000 ลิตร

การจัดการความร้อน: ความต่างของอุณหภูมิในถังขนาดมากกว่า 10,000 ลิตร มีค่ามากกว่า 2 °C

ความเฉื่อยของการผสม: ความล่าช้าของใบพัดมีค่ามากกว่า 0.8 หน่วย pH

ความไวเฉพาะต่อเซลล์: ขีดจำกัดความสามารถในการดำรงชีวิตของเซลล์ไมโอซาเทลไลต์ภายใต้ความเครียดจากไฮโดรไดนามิก

เนื้อเยื่อกล้ามเนื้อที่เพาะเลี้ยงขึ้นมาประกอบด้วยเซลล์ไมโอซาเทลไลต์เป็นส่วนใหญ่ เซลล์เหล่านี้มีความไวต่อความเครียดจากไฮโดรไดนามิกสูงมาก ความสามารถในการดำรงชีวิตลดลง 30–50% เมื่อสัมผัสกับแรงเฉือนในช่วง 1.5 พาสคาล ซึ่งเป็นระดับแรงเฉือนที่มักเกิดขึ้นบริเวณลำแสงหลังใบพัด (impeller wake) ของถังผสมขนาดใหญ่ ดังนั้นการออกแบบเพื่อรักษาความสามารถในการดำรงชีวิตของเซลล์นี้จำเป็นต้องคำนึงถึงการไหลที่สม่ำเสมอและต่อเนื่อง แทนที่จะใช้การผสมแบบปั่นป่วน (turbulent mixing)

การออกแบบการไหลแบบลามินาร์: การใช้รูปทรงเรขาคณิตในการออกแบบห้องเพาะเลี้ยงเซลล์ เพื่อควบคุมการไหลและให้เซลล์อยู่บริเวณศูนย์กลางของการไหล ซึ่งจะช่วยกำจัดกระแสวน (eddy currents)

การออกแบบตัวกลางที่ป้องกันแรงเฉือน: ตัวกลางที่มีคุณสมบัติป้องกันแรงเฉือนซึ่งมีลักษณะเป็นพอลิเมอร์ เช่น โพโลแซมเมอร์ 188 (Poloxamer 188) ซึ่งใช้ในกระบวนการที่อยู่ภายใต้การควบคุมของสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาสหรัฐอเมริกา (FDA)

การดำเนินการแบบไม่ใช้การกวน: การใช้ระบบไหลเวียนแบบปิดเพื่อแลกเปลี่ยนสื่ออย่างต่อเนื่องเพื่อควบคุมความเข้มข้นของแอมโมเนียและแลคเตต เป็นวิธีที่รุนแรง แต่ต้องใช้พลังงานสูง

เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมไม่มีผนังเซลล์ที่สามารถซึมผ่านได้ ดังนั้น เซลล์เหล่านี้จึงมีความไวต่อความเสียหายจากความเครียดเชิงกลอย่างมาก และความเสียหายต่อโครงสร้างเซลล์อาจเกิดขึ้นได้แม้ในระดับพลังงานต่ำกว่า 50 วัตต์ต่อลูกบาศก์เมตร

ในบริบทของการออกแบบไบโอรีแอคเตอร์สำหรับเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยง (cultured meat) ความเป็นจริงทางชีวภาพถือว่าการกวนเป็นข้อเสีย ไม่ใช่ข้อได้เปรียบ

การตรวจสอบความถูกต้องในโลกแห่งความเป็นจริง: เกณฑ์การประเมินประสิทธิภาพและไบโอรีแอคเตอร์สำหรับเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยง (cultured meat) ที่ได้รับการรับรองโดยสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาสหรัฐอเมริกา (FDA)

การอนุมัติการขยายสายการผลิตสำหรับการผลิตเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยง (cultured meat) ถือเป็นหลักฐานสูงสุดว่าบิโอรีแอคเตอร์พร้อมใช้งานจริง และระบบวิศวกรรมที่ออกแบบขึ้นมีความสอดคล้องตามเกณฑ์ด้านความปลอดภัย ความสามารถในการขยายขนาด และความสม่ำเสมอ การดำเนินงานในสถานที่ที่ได้รับการอนุมัติรายงานความหนาแน่นของเซลล์สูงกว่า 50 ล้านเซลล์ต่อมิลลิลิตร รอบการผลิต 60 วัน และรักษาสภาพปราศจากเชื้อภายใต้มาตรฐานห้องสะอาดระดับ ISO Class 5 สถานที่เหล่านี้ยังรายงานว่ามีการลดการใช้น้ำลง 80% เมื่อเทียบกับการเลี้ยงปศุสัตว์แบบดั้งเดิม จึงให้หลักฐานเชิงประจักษ์ที่ช่วยยืนยันข้ออ้างด้านความยั่งยืน ตัวชี้วัดประสิทธิภาพในการปฏิบัติงานระบุว่า แพลตฟอร์มการไหลเวียน (perfusion) ที่ผ่านการปรับแต่งอย่างเหมาะสมสามารถลดต้นทุนสื่อเลี้ยงเซลล์ที่แท้จริงลงเหลือต่ำกว่า 1 ดอลลาร์สหรัฐต่อลิตร เนื่องจากความหนาแน่นของเซลล์สูง ของเสียน้อย และระยะเวลาที่สื่อเลี้ยงเซลล์คงอยู่ในระบบยาวนานขึ้น ทั้งหมดข้างต้นยืนยันข้ออ้างว่า บิโอรีแอคเตอร์ที่ออกแบบมาเฉพาะสำหรับการผลิตเนื้อเยื่อที่เพาะเลี้ยง ซึ่งอิงจากชีววิทยาของเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม และเสริมด้วยวิศวกรรมที่ผ่านการรับรองสำหรับการใช้งานในอุตสาหกรรมอาหาร ได้ก้าวผ่านขั้นตอนของแนวคิดเชิงทฤษฎีไปสู่การผลิตเชิงพาณิชย์ที่ใช้งานได้จริงและสอดคล้องตามข้อกำหนด

คำถามที่พบบ่อย

อุปสรรคหลักที่บิโอเรแอคเตอร์แบบดั้งเดิมประสบในการผลิตเนื้อสัตว์ที่เพาะเลี้ยงมีอะไรบ้าง

เหตุผลหลักที่บิโอเรแอคเตอร์แบบดั้งเดิมไม่สามารถใช้กับการเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้คือ ระบบนั้นไม่สามารถจัดเตรียมสภาพแวดล้อมที่แม่นยำและควบคุมได้อย่างเข้มงวดตามที่เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมต้องการ

บิโอเรแอคเตอร์สำหรับการผลิตเนื้อสัตว์ที่เพาะเลี้ยงสามารถเอาชนะอุปสรรคที่เกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมได้อย่างไร

บิโอเรแอคเตอร์ดังกล่าวมีคุณสมบัติการออกแบบที่รวมถึงไมโครสปาร์เจอร์ (micro-spargers) เพื่อปรับปรุงการถ่ายโอนออกซิเจน ระบบการไหลเวียนแบบเพอริสตัลติก (peristaltic perfusion systems) เพื่อจัดส่งสารอาหาร และใบพัดที่สร้างแรงเฉือนต่ำ (low-shear impellers) เพื่อรักษาความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์

เหตุใดบิโอเรแอคเตอร์แบบสติร์เรด-แทงก์ (stirred-tank bioreactors) จึงไม่เหมาะสมนักสำหรับการผลิตเนื้อสัตว์ที่เพาะเลี้ยง

บิโอเรแอคเตอร์แบบสติร์เรด-แทงก์ก่อให้เกิดแรงเฉือนสูงซึ่งอาจทำลายเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อทำงานกับปริมาตรขนาดใหญ่ นอกจากนี้ยังมีประสิทธิภาพเชิงปฏิบัติการต่ำกว่า เนื่องจากต้องใช้พลังงานจำนวนมากเมื่อขยายขนาดการผลิต

เหตุใดบิโอเรแอคเตอร์แบบเพอร์ฟิวชันจึงเหมาะสมกว่าบิโอเรแอคเตอร์ประเภทอื่นสำหรับการผลิตเนื้อสัตว์ที่เพาะเลี้ยง?

บิโอเรแอคเตอร์แบบเพอร์ฟิวชันช่วยให้มีการจัดหาสื่อเพาะเลี้ยงใหม่อย่างต่อเนื่อง ซึ่งส่งผลให้ความเครียดจากแรงเฉือนลดลง และสามารถทำงานกับความหนาแน่นของเซลล์สูงได้ ข้อเสียหลักคือการใช้สื่อเพาะเลี้ยงจำนวนมากและกระบวนการฆ่าเชื้อที่เข้มข้น

ความท้าทายในการขยายขนาดบิโอเรแอคเตอร์สำหรับการผลิตเนื้อสัตว์ที่เพาะเลี้ยงมีอะไรบ้าง?

เมื่อขยายขนาดบิโอเรแอคเตอร์สำหรับการผลิตเนื้อสัตว์ที่เพาะเลี้ยง ความท้าทายหลักคือการถ่ายโอนออกซิเจน การควบคุมอุณหภูมิ การผสมผสานอย่างสม่ำเสมอ และการรักษาภาวะการแขวนลอยของเซลล์ให้เป็นเนื้อเดียวกัน เพื่อให้มั่นใจในความสามารถในการมีชีวิตรอดของเซลล์

ความสำคัญของการได้รับการรับรองจากสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาสหรัฐอเมริกา (FDA) ต่อการออกแบบบิโอเรแอคเตอร์สำหรับเนื้อสัตว์ที่เพาะเลี้ยงคืออะไร?

การรับรองจาก FDA แสดงให้เห็นว่าการออกแบบบิโอเรแอคเตอร์ให้ความสำคัญกับความปลอดภัย ความสามารถในการขยายขนาด และความสม่ำเสมอ และยังผ่านเกณฑ์การออกแบบที่จำเป็นเพื่อสนับสนุนการผลิตในเชิงพาณิชย์และการผลิตที่สอดคล้องตามข้อกำหนดด้านกฎระเบียบ